DNA 双螺旋结构中，碱基配对遵循 Watson-Crick 配对规则：
🔹 腺嘌呤 (A) 与 胸腺嘧啶 (T) 配对，形成 2 个氢键；
🔹 胞嘧啶 (C) 与 鸟嘌呤 (G) 配对，形成 3 个氢键。
由于 G-C 配对多一个氢键，GC 含量越高的 DNA 双链越稳定，熔解温度 (Tm) 也越高。

互补链 (Complement)：直接根据配对规则替换每个碱基（A↔T, C↔G），保持原方向。例如 5'-ATCG-3' 的互补链是 3'-TAGC-5'。

反向互补链 (Reverse Complement)：先取互补，再将序列反转。这是生物学中实际存在的互补链在 5'→3' 方向上的表示。例如 5'-ATCG-3' 的反向互补链是 5'-CGAT-3'。

在分子生物学实验（如引物设计、限制性内切酶位点分析）中，反向互补链更为常用，因为它反映了另一条链在相同方向（5'→3'）上的序列。

DNA 双螺旋的两条链方向相反，这是由 核苷酸的化学结构决定的：
🔹 每条 DNA 链都有一个 5' 端（磷酸基团）和一个 3' 端（羟基）；
🔹 DNA 聚合酶只能从 5'→3' 方向合成新链；
🔹 两条链反向平行使得碱基能够正确配对，形成稳定的双螺旋结构；
🔹 这种反向平行的排列对于 DNA 复制和转录至关重要——一条链作为模板（3'→5'），新链沿 5'→3' 方向合成。

GC 含量（G+C 碱基占总碱基的百分比）是 DNA 序列的重要特性：
🔹 热稳定性：GC 含量越高，Tm 值越高，DNA 双链越难分开（因为 G-C 有 3 个氢键，A-T 只有 2 个）；
🔹 PCR 引物设计：理想的引物 GC 含量通常在 40%-60% 之间；
🔹 基因组特征：不同物种的基因组 GC 含量差异很大（如人类约 41%，链霉菌可达 70% 以上）；
🔹 密码子偏好性：高 GC 含量区域往往对应特定的密码子使用偏好。

本工具使用 Wallace 规则估算 Tm 值（适用于短寡核苷酸，通常 < 20-25 bp）：
Tm = 2°C × (A + T 数量) + 4°C × (G + C 数量)

⚠️ 注意：Wallace 规则是一个简化公式，适用于低盐浓度下的短序列。对于更精确的计算（特别是长序列或高盐条件），需要使用 Nearest Neighbor 方法。本工具提供的 Tm 值仅供参考，实际实验条件（盐浓度、DNA 浓度、pH 等）会影响真实的熔解温度。

本工具主要针对 DNA 序列（A、T、C、G）。如果您输入了 U（尿嘧啶），它将被识别为 RNA 碱基并按照 A-U 配对规则处理（A 与 U 配对，类似于 DNA 中 A-T 配对）。

如果您需要专门的 RNA 分析工具，可以关注后续的 RNA 工具更新。对于混合序列，工具会自动适配，但建议纯 DNA 序列使用以获得最佳体验。

嘌呤（A + G，双环结构）与 嘧啶（C + T，单环结构）的比值：
🔹 在双链 DNA 中，嘌呤总数 = 嘧啶总数（Chargaff 规则），比值接近 1:1；
🔹 对于单链序列，该比值反映碱基组成偏向性；
🔹 偏离 1:1 的比值可能影响 DNA 的局部结构和蛋白质结合特性；
🔹 在序列设计（如 siRNA、反义寡核苷酸）中，嘌呤/嘧啶分布会影响链的稳定性和靶标结合能力。